PDA培养基,即马铃薯葡萄糖琼脂培养基(Potato Dextrose Agar),是由马铃薯、葡萄糖和琼脂三种成分组成的固体半合成培养基。由于其独特的配方和优势,PDA培养基在微生物学中得到了广泛应用,尤其在培养酵母、霉菌、蘑菇等真菌类微生物时,具有重要作用。这种培养基不仅能够促进微生物的生长与繁殖,还具有原料节省的特点,因此在科研和生产中被广泛使用。
PDA培养基的制作过程
1. 材料准备与初步熬煮
根据培养基的配方,准备去皮土豆并切成小块。将土豆块放入锅中,加入1000毫升清水。然后,将锅放置于加热设备上,继续加热至水沸腾,并保持沸腾状态20至30分钟。在这个过程中,土豆中的可溶性成分会释放到水中,形成土豆提取液。使用两层纱布将热液过滤,去除渣滓,滤液需要收集并补充水分至1000毫升,以确保浓度适宜。
2. 配料溶解与加热
将滤液倒回锅中,加入20克葡萄糖和15至20克琼脂(琼脂应预先敲碎,以便更好地溶解)。接着,将混合液放置在石棉网架上,以小火加热,并不断用玻璃棒搅拌,避免琼脂粘底或溢出。继续加热,直到琼脂完全溶解。可以根据需要补充水分,直到达到指定的培养基总量。
3. 分装与灭菌
根据实验要求,将调制好的培养基分装到试管或500毫升的三角瓶中。在分装时,可以使用三角漏斗,以防止培养基粘附在瓶口或试管口,避免污染。分装量方面,固体培养基通常为试管高度的1/5,待灭菌后可将其制成斜面;三角瓶的培养基不应超过瓶容积的一半。而对于半固体培养基,分装至试管高度的1/3较为合适,灭菌后应垂直待凝固。
4. 加塞与密封
在培养基分装完毕后,需要将试管口或三角瓶口用棉塞封闭,防止外界微生物的侵入,确保培养过程不受污染。棉塞不仅起到封闭作用,还要保持良好的通气性,以供微生物生长需要的氧气。为进一步防止污染,可以使用泡沫塑料塞、试管帽等替代棉塞。
5. 包扎与标识
培养基分装和加塞后,应使用麻绳或橡皮筋将所有试管捆绑整齐,并在棉塞外层包裹一层牛皮纸。这层纸可以有效避免灭菌时的冷凝水棉塞,保证培养基的洁净。每个包扎好的试管上还应标明培养基的名称、实验组别和配制日期,以便管理和追踪。
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