在前一期的内容中，我们探讨了脱水或固定过程中的塌陷与皱缩问题，并初步怀疑了固定液及蔗糖溶液制备时溶剂选择的重要性。本篇我们将继续深入探讨这一话题。
通常，我们在实验中常用的溶剂主要有两种：三蒸水和PBS（磷酸缓冲盐溶液）。其中，PBS的使用尤为普遍，大部分情况下是直接购买或由粉末自行配制。
特别地，对于细胞实验而言，PBS的浓度与配制方式至关重要。例如，当用于细胞培养时，通常采用Gibcol的1X PBS，这里的“1X”意味着其浓度为0.01mol/L的溶液。而在免疫组化或免疫荧光操作中，则更多使用PBS粉末配制的溶液。
对于不同用途的PBS，其配方存在细微差别。如用于免疫组化的PBS和用于细胞培养的PBS在成分上有所不同。前者主要维持渗透压，保证细胞不变形；而后者除了维持渗透压外，还需考虑Na/K平衡以维持细胞的活性。
值得注意的是，0.01 mol/L PBS的浓度是指溶液中某个特定离子的浓度，而非总浓度。具体地，该浓度主要指的是PO42-的浓度。这涉及到溶液中各离子的具体浓度计算，如NaCl为0.13675 mol/L，HPO42-为0.0081 mol/L等。
关于实验现的眼球脱水或固定后的皱缩与塌陷问题，我们首先需考虑的是渗透压的问题。渗透压的计算虽有一定公式，但实际操作中更常采用的经验法则是：渗透压与总离子浓度（摩尔浓度）成正比。这一原则有助于我们理解不同溶液的渗透压差异。
对比生理盐水、0.01 mol/L PBS及0.1 mol/L PBS的总离子浓度，我们可以发现后者与前两者的差距较大。为使实验条件更为接近生理状态，我们可适当调整PBS中的NaCl含量。例如，我们可以拟定最终的0.1 mol/L PBS配方为：NaH2PO4·2H2O、Na2HPO4·12H2O及适量NaCl。若考虑到NaCl对最终渗透压的影响，我们甚至可以考虑去除一小部分NaCl，这样得到的PB溶液与生理盐水及低浓度PBS在总离子浓度上相差无几。
选择合适的溶剂及配方对于维持溶液的渗透压、PH值等关键参数至关重要。例如，我们最终选择了保持渗透压稳定的PB来配置固定液和脱水剂。当使用PB溶液作为蔗糖溶液的溶剂时，可以确保PH值维持在7.2-7.4之间，从而避免在冰冻过程中由盐类造成的额外损伤。
总体而言，精确的溶剂选择和配方配制是实验成功的关键。通过合理调整PBS及PB溶液的配方，我们可以更好地控制实验条件，减少在脱水或固定过程现的皱缩与塌陷问题。