实验原理
通过特定的化学处理或法，使细胞膜的通透性发生暂时性改变，从而形成能够接受外源DNA分子的感受态细胞。其中，使用RbCl法制备的感受态细胞转化效率相对较高。
实验材料与器材
试剂
MnCl2
HEPES
CaCl2
SOB培养基
SOC液体培养基
液氮（用于保存和复苏细胞）
器材
水浴锅（用于细胞培养和试剂预热）
三角瓶玻璃瓶（用于细胞培养）
冷冻离心机（用于细胞分离和浓缩）
滤膜（用于过滤和净化培养基）
离心管（用于细胞收集和储存）
称量天平（用于精确称量试剂）
实验步骤
一、LB培养基的配制（加入2%琼脂粉以制备固体培养基）
二、TFBI溶液的配制方法
三、TFBII溶液的配制方法
四、高效感受态细胞的制备流程如下：
- 从-80℃的冰箱中取出DH5α菌种，将其在无抗性的LB平板上划线，然后在37℃下进行过夜培养以激活菌种。
- 从LB平板上选择单菌落，优先选择菌落饱满、边缘平滑、个头较大且长势良好的菌落。
- 将上述选定的单菌落接种于一个装有10ml无抗性LB液体培养基的25ml锥形瓶中，然后在37℃下进行振荡培养过夜。
- 继续振荡培养（摇床转速200rpm，大约12小时），充分激活菌种。
- 将上述菌液以1:100的比例接种到大锥形瓶中，并在37℃下继续振荡培养2至2.5小时，直至OD590值达到0.4~0.6。
- 将培养好的菌液转移到洁净无菌的50ml离心管中，置于冰上放置10分钟，同时将TBFI溶液进行冰浴预冷。
- 在4℃下，以4000rpm的速度离心10分钟，然后弃去上清液。
- 加入预冷的TBFI溶液（体积为初始细菌培养基的1/2.5），轻轻悬浮细胞，再次置于冰上放置10分钟。
- 再次以4000rpm的速度在4℃下离心10分钟，然后弃去上清液。
- 加入预冷的TBFII溶液（体积为初始细菌培养基的1/25），轻轻悬浮菌沉。
- 将制备好的感受态细胞分装到EP管中，每管分装100μl，并确保EP管已预冷。
- 将分装好的感受态细胞保存于-80℃冰箱中，并定期活化以保持其活性。请注意，在保存过程中不要断电。
[ 特别提示 ]
-80℃冰箱储存的感受态细胞在6-8周后转化率可能会降低。为验证其有效性，可使用已知标准及浓度的闭环质粒进行鉴定。