14. 面对非特异性扩增条带，如何提升产物特异性？
通过以下措施，可增强PCR产物特异性：
利用AST工具分析引物的3’端是否与目标位点外的序列存在互补，若存在，则需重新设计引物或调整PCR反应条件。
完善PCR反应条件，包括设置梯度退火温度和时间，减少PCR循环次数，采用touchdown PCR技术，或者改用两步法PCR。
对模板用量进行合理调整也是重要一环。
15. PCR产生错误时，应如何应对？
为避免PCR过程中的错误，建议采用高保真酶，并注意以下影响因素：
过度循环可能导致PCR产物量增加，从而降低聚合酶效率并导致错误。过高的Mg2+浓度也可能影响酶的校正活性。模板DNA损伤、引物质量与特异性等问题也应得到关注。
在分析或回收PCR产物时，尽量减少紫外线照射时间，以保护模板DNA免受损伤。
16. PCR扩增无目的条带的原因是什么？
PCR扩增无目的条带的产生可能与以下因素有关：
模板方面：若模板中含有杂蛋白质、Taq酶抑制剂、未彻底变性的核酸或靶序列存在变异等，都可能影响PCR的有效扩增。
引物方面：引物设计不合理，如长度不足、形成二聚体等，需重新设计高质量、高纯度的引物，并确保引物的存储条件适宜。
酶的活性与PCR条件：酶失活或PCR条件设置不当（如变性、退火、延伸等环节的参数设置不合理）也可能导致无目的条带的产生。
17. 如何改善PCR产物电泳出现的拖尾现象（“Smear”）？
拖尾现象通常是由于引物设计不合理、PCR条件不理想或过度循环造成的。为改善此现象，可采取以下措施：
减少模板添加量、提高退火温度、采用touchdown PCR、减少PCR循环数、重新设计引物以及重新扩增PCR产物等。
18. PCR扩增出现假阳性的原因是什么？
假阳性条带通常与目的序列条带大小一致，且有时条带更整齐、亮度更高。其产生原因可能包括：
引物设计不合理：若选择的扩增序列与非目的扩增序列具有同源性，扩增出的PCR产物可能为非目的性序列。靶序列或引物过短也可能导致假阳性。
出现污染：PCR过程中可能发生交叉污染或空气中的核酸污染，导致假阳性结果。